猪2型圆环病毒原核表达产物的免疫原性测定

• 作者: 刘怀然 司昌德 姜骞 曲连东 韩凌霞
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 圆环病毒属 荧光抗体技术,间接 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 118-121,封三
• 页数: 5页
• 分类号: R446.52
• 字数: 3605字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2006.02.011

摘要

目的检测猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组原核表达产物的免疫原性.方法根据PCV2 JXL株序列(GenBank登录号AY 491310),设计合成引物,利用多聚酶链式反应(PCR)从含有PCV2接种猪肾细胞PK15中扩增了Cap蛋白的氨基端片段(737-421nt),克隆入上游带有谷光苷肽-S-转移酶的原核表达载体pGEX-6p-1中,获得重组质粒pGEX-PCV737-421.PCV2 Cap蛋白羧基端(426-37nt)和Rep蛋白已在过去的研究中分别融合表达.利用IPTG对3种重组大肠杆菌BL21进行诱导,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)以及对PCV2阳性猪多抗血清的蛋白免疫印迹试验,在此基础上,将3种SDS-PAGE分离粗纯的重组表达产物碾碎后分别免疫BALB/c小鼠,用获得的抗鼠血清与PCV2病毒感染PK15细胞做间接免疫荧光抗体试验(IFA).结果PCV2 Cap蛋白的氨基端片段能在大肠杆菌中表达,且Cap蛋白羧基端和Rep蛋白的原核表达产物都能在免疫印迹试验中被PCV2阳性猪血清检测出特异性条带,重组蛋白免疫鼠血清可在IFA试验中观察到特异性的荧光分布,即检测到培养细胞中的病毒抗原.结论PCV2全基因组都可以用原核系统高效表达,且表达产物具有免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲连东	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心	40	213	8.0	13.0
2	司昌德	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心	19	103	6.0	10.0
3	韩凌霞	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心	37	191	9.0	12.0
4	刘怀然	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心	23	161	8.0	11.0
5	姜骞	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心	15	101	6.0	10.0