FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒穿梭质粒的构建

• 作者: 张兴旺 李志勇 柳纪省 殷相平 王勤 王辉 谢庆阁
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 全开放阅读框 克隆 穿梭载体
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 93-97
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6|Q785
• 字数: 3443字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.02.003

摘要

为研制FMD复制缺陷型腺病毒活载体疫苗,通过RT-PCR方法获得了O型口蹄疫病毒(FMDV)全开放阅读框(ORF)基因片段,将其克隆到pMD18-T载体后测序,再将ORF编码基因定向克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒.经PCR、酶切及测序鉴定,所克隆的ORF编码基因序列与原始强毒株Akesu/58的ORF编码基因比较,L、P1、P2、P3基因的核苷酸同源性分别为98.8%、97.9%、99.0%和97.6%,PCR、酶切鉴定重组腺病毒穿梭质粒均获得了长约6.9 kb的目的基因片段.表明,成功获得了含有O型FMDV全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整FMDV开放阅读框架的编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒.