重叠PCR合成蓖麻毒素B链基因及其在大肠杆菌中表达和抗原性分析

• 作者: 康琳 王俊虹 王景林 高姗
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 蓖麻毒素B链 克隆与表达 亲和纯化 抗原性
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: R996.2
• 字数: 4476字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2006.01.008

摘要

目的:表达蓖麻毒素B(RTB)链蛋白,为制备RTB特异性抗体奠定基础.方法:采用密码子优化软件对RTB编码基因序列重新优化设计,以18条长片段寡核苷酸引物经两步重叠PCR合成RTB基因片段,并在RTB的C端引入6×His标签序列,插入表达载体pBV220,转化E.coli DH5α获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化.利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定重组RTB蛋白的抗原性.结果:表达工程菌株E.coliDH5α在42℃经诱导3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的65.48%,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTB相对分子质量相符,为29×103左右.表达产物经M-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度达96.21%,并可得到约25 mg/L重组RTB蛋白.结论:在国内首次应用重叠PCR合成RTB基因并实现高表达,纯化重组RTB蛋白可被抗天然蓖麻毒素多抗所识别,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王景林	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	44	147	6.0	9.0
2	王俊虹	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	3	5	2.0	2.0
3	康琳	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	21	51	4.0	5.0
4	高姗	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	11	31	3.0	4.0