细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定

• 作者: 丁淑琴 张焱 王洁 王淑静 赵巍
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球蚴 热休克蛋白HSP70 重组质粒 表达
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 764-766,799
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3713字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.08.019

摘要

目的 构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,EG)2热休克蛋白70(heat shock protein,2HSP70)表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定.方法 从EG2HSP70/pGEM-T/JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因,将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21,鉴定后以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE检测其表达水平,用亲和层析纯化并分离重组蛋白,利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性.结果 酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒;IPTG诱导表达后,融合蛋白占菌体总蛋白的39%,占裂解物上清总蛋白的70.4%,表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶性状态存在.亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70,通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别.结论 成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒,重组的EG2HSP70能够高效表达,表达的EG2HSP70具有免疫学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王淑静	宁夏医学院病原细胞学教研室	25	213	10.0	13.0
2	王洁	宁夏医学院病原细胞学教研室	24	148	8.0	11.0
3	张焱	宁夏医学院病原细胞学教研室	27	193	9.0	12.0
4	丁淑琴	宁夏医学院病原细胞学教研室	12	81	7.0	8.0
5	赵巍	宁夏医学院病原细胞学教研室	43	230	9.0	11.0