细粒棘球蚴AgB8/2基因的原核表达及免疫学鉴定

• 作者: 李树裕 李洁 毕玉新 王媛媛 王志钢 王红霞 陈献威
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 细粒棘球蚴 AgB8/2基因 基因克隆 原核表达 斑点免疫金渗滤法
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 130-135
• 页数: 6页
• 分类号: Q96
• 字数: 4659字
• 语种: 中文

摘要

旨在克隆细粒棘球蚴 AgB8/2基因,优化原核表达体系,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值.采用 RT-PCR扩增 AgB8/2基因 cDNA,构建原核表达载体pET-AgB8/2并在大肠杆菌 BL21(DE3)中表达,优化表达条件.纯化的AgB8/2融合蛋白经 Western blot鉴定正确后,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值.结果显示,克隆的 AgB8/2基因包含了 273 bp的完整ORF,序列分析表明与其它已报道的AgB8/2 cDNA序列的同源性在 99%～100%之间.优化的表达条件为,当菌液 OD_(600)值为0.6时,加入终浓度为0.05 mmol/L的 IPTG,37℃,振荡培养5 h.纯化的蛋白经 Western blot鉴定为目的蛋白.克隆的 AgB8/2基因高度保守,原核表达载体pET-AgB8/2构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体.