内蒙古羊源细粒棘球蚴Eg95基因原核表达及蛋白鉴定

• 作者: 李志伟 李洁 杨军 湛奎 王志钢 陈献威
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 细粒棘球蚴 Eg95 原核表达 蛋白纯化 生物活性
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 57-60
• 分类号: S826|S852.7
• 字数: 3288字
• 语种: 中文

摘要

在克隆内蒙古羊源细粒棘球蚴疫苗候选基因Eg95的基础上,构建原核表达载体pET-Eg95并转化E.coli BL21(DE3),优化表达体系,获得Eg95纯化蛋白.将Eg95基因从克隆质粒pMD19-T-Eg95亚克隆到原核表达载体pET44a(+)上,构建原核表达载体pET-Eg95,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,优化表达条件.纯化的 Eg95 融合蛋白经 SDS-PAGE和Western Blot鉴定其正确性和免疫学活性.原核表达载体pET-Eg95在大肠杆菌中高效表达,优化的原核表达条件为:当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5 h.纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定为目的蛋白并具有生物学活性.原核表达载体pET-Eg95构建正确并可高效表达可溶性Nus-Eg95融合蛋白,可作为特异性抗原应用于免疫印迹法检测血清抗体.