细粒棘球绦虫AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原表达系统的构建

• 作者: 丁剑冰 古力帕丽·麦曼提依明 吾拉木·马木提 温浩 陈洁 陈璐 马海梅 马秀敏
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 AgB8/1-AgB8/2重组嵌合抗原 原核表达质粒
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 502-505,510
• 分类号: R383.3+3
• 字数: 3728字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.06.010

摘要

目的 构建pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达.方法 从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,人工合成EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性.通过对pUCm-T/AgB8/1-AgB8/2重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确后,转化至E.coli BL21(DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1-AgB8/2重组嵌合蛋白.用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平.结果 测序表明,AgB8/1-AgB8/2嵌合抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒.SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组嵌合蛋白得到成功表达,在相对分子量约38 kD处有表达条带.结论 成功构建了pET32a-AgB8/1-AgB8/2原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1-AgB8/2嵌合重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础.