重组人源MPG基因真核表达载体构建及转染非小细胞肺癌多药耐药细胞的研究

• 作者: 余时沧 李玉英 李瑾 钱桂生 陆卫忠 陈维中 黄桂君
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: N-甲基化嘌呤DNA糖基化酶 载体 基因表达 肺癌 多药耐药
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 465-468
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R730.59|R734.2
• 字数: 3278字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.05.027

摘要

目的构建人N-甲基化嘌呤DNA糖基化酶(N-methylpurine DNA glycosylase,MPG)基因真核表达载体,并研究其在稳定转染的人非小细胞肺癌多药耐药细胞中的表达情况.方法应用分子克隆技术构建pCMV-Script/MPG重组真核表达载体;应用脂质体介导的基因转染技术将其导入人非小细胞肺癌多药耐药细胞株A549/CDDP内;应用G418筛选稳定表达的转染细胞;应用PCR检测pCMV-Script载体上的NEOr基因,应用RT-PCR及Western blot检测MPG基因的表达.结果构建产物经限制性酶切分析及基因序列测定证实为pCMV-Script/MPG重组表达载体;转染pCMV-Script/MPG载体组(MP组)及转染pCMV-Script载体组(P组)细胞内检测到NEO r基因,未转染组(C组)则未检测到;MP组细胞内MPG mRNA水平较P组及C组细胞显著增高(P＜0.01);MP组细胞内MPG蛋白质水平较P组及C组细胞显著增高(P＜0.01).结论成功地构建了人MPG基因表达载体,并在人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/CDDP获得了稳定、高效的表达.