携带小鼠白细胞介素-12 siRNA基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达

• 作者: 罗建飞 胡炜焰
• 来源期刊: 微循环学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 白细胞介素12干扰RNA 腺病毒载体 克隆 T4连接酶 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 51-52,55
• 页数: 3页
• 分类号: Q785
• 字数: 2579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1740.2006.02.019

摘要

目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12 siRNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础.方法:将IL-12p35 siRNA和IL-12p40 siRNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD Adeno-XTM体外连接后代共转化大肠杆菌DH5α菌株, 重组腺病毒质粒经过293细胞的包装扩增及氯化铯(CsCl)纯化,生成带有IL-12p35和IL-12p40 siRNA基因的重组腺病毒载体,感染DC细胞.结果:经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性;经测定,病毒滴度为2.5×1010efu/ml.结论:成功构建带有IL-12p35 siRNA 和IL-12p40 siRNA cDNA的重组腺病毒载体,其所携带的载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达,为进一步的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗建飞	武汉大学人民医院胃肠外科	34	154	7.0	11.0
2	胡炜焰	武汉大学人民医院胃肠外科	14	42	3.0	6.0