融合牛肠激酶轻链EKL包涵体蛋白的复性纯化

• 作者: 张元兴 易进华
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 融合蛋白 肠激酶 复性 包涵体
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 811-815
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2006.05.020

摘要

大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,主要以包涵体形式存在.包涵体经4mol/L尿素和0.5% Triton X-100洗涤,以6mol/L盐酸胍、100mmol/LDTT溶解,在胱氨酸存在下,以脉冲加样方式复性.融合蛋白复性在6mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/mL和复性终蛋白浓度0.3mg/mL为最佳复性方案.复性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切.经IDA-Sepharose及Q-Sepharose纯化,rEKL纯度可达95%以上,可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA.实现了大规模生产rEKL,每升发酵液经复性及纯化后,可得rEKL60mg/L以上,使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张元兴	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	126	951	16.0	24.0
2	易进华	华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室	4	18	3.0	4.0