重组鼠源性肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达

• 作者: 于永利 吴秀丽 孙琳 王丽颖 王燕媚
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肠激酶轻链 镍亲和层析 包涵体
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 360-363
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2006.03.002

摘要

目的:制备能在原核表达系统中表达并特异性识别(Asp)4-Lys序列的鼠源性肠激酶,为推广应用重组肠激酶提供技术平台.方法:采用RT-PCR从C57BL/6J小鼠的十二指肠肠系膜黏膜组织中钓取肠激酶轻链的cDNA,将其克隆入pET32a原核表达载体中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,然后以镍亲和层析法对表达产物进行纯化.结果:所钓取的肠激酶轻链编码序列与GenBank中的序列一致,比较发现其编码的氨基酸序列在小鼠与人、牛之间的同源性大于75%.利用pET32a/BL21(DE3)表达系统成功地在大肠杆菌中表达了重组鼠源性肠激酶轻链,表达量约占大肠杆菌BL21(DE3)总蛋白的30%,但多以包涵体的形式存在.经镍亲和层析法纯化的重组肠激酶多以聚体形式存在.结论:鼠源性肠激酶轻链在原核细胞中多以包涵体形式表达,天然构象重组肠激酶的获得还需对表达系统进行优化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙琳	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	30	144	6.0	10.0
2	王燕媚	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	10	56	4.0	7.0
3	于永利	吉林大学基础医学院免疫学教研室	86	281	8.0	12.0
4	王丽颖	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	82	282	9.0	13.0
5	吴秀丽	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	27	81	4.0	8.0