表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

• 作者: 余细勇 单志新 杨敏 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹 邓春玉 郑猛
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞游走抑制因子 RNA,反义 人脐静脉血管内皮细胞 脂质体
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1263-1267
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.11
• 字数: 2981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.07.003

摘要

目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用.方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF.用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞,用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平.将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-an-tiMIF)细胞.将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF,用Real-time定量PCR鉴定MIF mR-NA的表达水平.结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF.MIF反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%(P＜0.05).建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株.HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制,表达水平降低40%(P＜0.05).结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达,建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs.