干扰Fas受体表达的串联shRNA表达载体的构建

• 作者: 刘明社 封江南 张国英 张芸 王兰 赵中夫
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Fas RNAi shRNA 串联质粒
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2174-2179
• 页数: 6页
• 分类号: R9
• 字数: 4909字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2006.22.005

摘要

目的:利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对Fas的2个短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)串联表达的载体.方法:设计表达2个shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析.分别用SacI+SalI双酶切重组质粒,胶回收酶切pEGFP6-1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段,T4 DNA Ligase连接酶切大、小片段,得到pEGFP6-1-siFas1+siFas2重组质粒.转化感受态细胞DH5α,扩增,提取串联重组质粒进行酶切鉴定.结果:成功构建靶向Fas的2个shRNA串联重组质粒载体pEGFP6-1-siFas1+siFas2.酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功.结论:表达2个靶向Fas的shRNA表达框成功构建在一个重组质粒载体上.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王兰	山西大学生命科学与技术学院	123	1118	16.0	28.0
2	张国英	长治医学院肝病研究所	30	130	6.0	10.0
3	赵中夫	长治医学院肝病研究所	95	498	12.0	17.0
4	刘明社	长治医学院肝病研究所	72	377	9.0	15.0
5	封江南		6	35	4.0	5.0
6	张芸	长治医学院肝病研究所	37	204	7.0	12.0