HPV-16 E4原核表达系统的建立和表达特性研究

• 作者: 庄永华 张卫东 施桥发 李明远 李虹 杨靖 王保宁 蒋忠华
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: HPV-16 E4基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 361-364
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2006.03.007

摘要

目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16) E4 基因( E4 ),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性.方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增 E4 完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4).经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果克隆到完整 E4 基因为342 bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%.在28 ℃和37 ℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导18 h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Western blot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His).结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16 E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础.