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高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用
高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用
作者:
云琳
周倩
张瑞萍
彭玲
王皓
郭亚军
陆斌
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
逆转录病毒载体
T细胞
内部核糖体进入位点
摘要:
目的: 构建能高效转染人T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统,并与传统的逆转录病毒载体系统做比较.方法: 首先在原载体pCMMP-EGFP的基础上,构建携带内部核糖体进入位点(IRES)基因的逆转录病毒载体pCMMP-IRES-GFP.将嵌合T细胞受体基因插入该载体中,与另外两个辅助载体pMD.MLVgag.pol和pHDM.G共同转染包装细胞293T.48 h后收培养上清,高速离心病毒.同时将嵌合T细胞受体基因插入传统的逆转录病毒载体pLXSN中,并转染包装细胞PA317,用G418加压筛选出转染的PA317细胞克隆.扩大培养48 h后,收细胞培养上清即为病毒液,分别用上述两种方法得到的病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒的滴度.取适量病毒液感染用PHA激活后的人原代T细胞,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光,并用流式细胞术(FCM)检测病毒感染的效率.结果: 成功地构建逆转录病毒载体pCMMP-IRES-GFP.将目的基因插入该载体中,与pMD.MLVgag.pol和pHDM.G共同转染包装细胞293T.培养48 h后,离心收获浓缩的上清中含有滴度为2.15×1011VP/L的病毒.以其感染用PHA激活后的人原代T细胞48 h后,在荧光显微镜下能观察到绿色荧光蛋白(GFP)的表达.FCM检测病毒对T 细胞的感染效率为50%~60%,并可用FCM进行分选.而用pLXSN载体转染的PA317细胞,包装得到的病毒滴度为6.43×109VP/L,病毒感染T细胞的效率仅为5%~10%.结论: 构建了能高效转染T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统,为T细胞的基础与临床研究打下了基础.
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逆转录病毒科
生长激素
成纤维细胞
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人类学
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文献信息
篇名
高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用
来源期刊
细胞与分子免疫学杂志
学科
医学
关键词
逆转录病毒载体
T细胞
内部核糖体进入位点
年,卷(期)
2006,(4)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
420-422,426
页数
4页
分类号
R392
字数
3657字
语种
中文
DOI
10.3321/j.issn:1007-8738.2006.04.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
王皓
第二军医大学肿瘤研究所
72
476
11.0
18.0
2
云琳
16
58
4.0
7.0
3
张瑞萍
第二军医大学肿瘤研究所
31
137
6.0
11.0
5
郭亚军
第二军医大学肿瘤研究所
36
219
8.0
13.0
6
彭玲
第二军医大学肿瘤研究所
6
18
3.0
4.0
7
陆斌
第二军医大学肿瘤研究所
14
47
4.0
6.0
8
周倩
第二军医大学肿瘤研究所
3
9
2.0
3.0
传播情况
被引次数趋势
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引文网络
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参考文献(2)
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2004(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2005(1)
参考文献(1)
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参考文献(0)
二级参考文献(0)
引证文献(0)
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引证文献(1)
二级引证文献(0)
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引证文献(0)
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引证文献(1)
二级引证文献(1)
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引证文献(1)
二级引证文献(1)
2013(1)
引证文献(0)
二级引证文献(1)
2015(1)
引证文献(0)
二级引证文献(1)
2017(1)
引证文献(0)
二级引证文献(1)
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节点文献
逆转录病毒载体
T细胞
内部核糖体进入位点
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
细胞与分子免疫学杂志
主办单位:
陕西省免疫学会
中国免疫学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1007-8738
CN:
61-1304/R
开本:
大16开
出版地:
西安市长乐西路169号
邮发代号:
52-184
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
7013
总下载数(次)
22
总被引数(次)
39763
相关基金
国家高技术研究发展计划(863计划)
英文译名:
The National High Technology Research and Development Program of China
官方网址:
http://www.863.org.cn
项目类型:
重点项目
学科类型:
信息技术
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细胞与分子免疫学杂志2006年第5期
细胞与分子免疫学杂志2006年第4期
细胞与分子免疫学杂志2006年第3期
细胞与分子免疫学杂志2006年第2期
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