尿激酶原在培养上清液中稳定性的研究

• 作者: 李天德 杨波 王广义 王玉堂 盖鲁粤 陈练
• 来源期刊: 心血管康复医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酶稳定性 尿纤溶酶原激活物 糖基化
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 471-475
• 页数: 5页
• 分类号: R446.1209
• 字数: 3969字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0074.2006.05.019

摘要

目的: 探讨尿激酶原糖基化对其表达稳定性的影响.方法: 将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),构建非糖基化尿激酶原.用基因重组的方法将重组尿激酶原和天然尿激酶原转染至dh-CHO细胞(二氢叶酸还原酶缺陷型--中国仓鼠卵巢细胞)中培养.收取无血清培养上清为检测标本.用嗜热杆菌的金属蛋白酶(thermolysin)激活尿激酶原.用抑肽酶(aprotinin)终止激活反应.生色底物S-2444用于显色反应.在405nm波长处测定OD值(分光光度值)以确定双链成分的比例.在不用thermolysin激活的条件下,用公式计算单链尿激酶原比例.将重组尿激酶原和天然尿激酶原的培养上清液置于4℃和37℃.每隔12 h测定总活性和单链成分比例.经过阳离子层析和凝胶层析纯化后,测定蛋白产品浓度、活性.以SDS-PAGE电泳鉴定蛋白质分子量和蛋白含量.结果: 在37℃下天然尿激酸原(糖基化)的活性远高于重组尿激酶原(非糖基化).无论4℃或37℃,糖基化尿激酶原的单链比例均高于非糖基化尿激酶原.纯化后的天然尿激酶原蛋白产品浓度和活性均高于重组尿激酶原.SDS-PAGE电泳结果提示天然尿激酶原浓度高于重组尿激酶原,分子量低于重组尿激酶原.结论: 较高的温度加速原激酶原降解.Asn302位的糖基化位点有益于尿激酶原在培养上清液中的稳定性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	盖鲁粤	解放军总医院心内科	196	994	16.0	22.0
2	陈练	解放军总医院心内科	70	314	9.0	12.0
3	李天德	解放军总医院心内科	71	437	11.0	18.0
4	王玉堂	解放军总医院心内科	137	501	9.0	15.0
5	王广义	解放军总医院心内科	48	256	9.0	14.0