分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

• 作者: 季煜华 李君武 李小兰 林绍强 胡萍 韦静 黄泽棋
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PD-L1 混合淋巴细胞培养 细胞因子 1型糖尿病
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1009-1012
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3251字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.11.012

摘要

目的 构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究.方法 以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3.1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1;用脂质体将重组子导入NIT细胞,转染后的NIT命名为NITp.以Western blot鉴定重组蛋白的表达.MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响;用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响.结果 RT-PCR得到约730bp目的基因片段,测序结果显示该目的基因与Gen-Bank上的序列相符;Western blot分析提示NITp分泌性表达目的蛋白;NITp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖,其效应呈剂量依赖性;反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示,培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低,与正常对照组差异有统计学意义.结论 成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1,PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季煜华	暨南大学组织移植与免疫中心	40	200	7.0	12.0