携带乙肝核心抗原基因复制缺陷型重组腺病毒的高效制备和表达

• 作者: 欧阳玲 江鹏飞 黄呈辉 黄建国
• 来源期刊: 中国医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 乙肝病毒 核心抗原 基因转染
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 616-618,621
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2019.2006.06.016

摘要

目的 构建表达乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的复制缺陷型重组腺病毒载体.方法 扩增乙肝病毒(HBV)C基因片段,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共同电转化到大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,经卡那霉素抗性筛选和酶切鉴定筛选出携带HBV C区基因的重组腺病毒载体,用脂质体包裹Pac Ⅰ酶切线性化的重组质粒,转染到293细胞内进行重组腺病毒的包装.体外转染真核细胞,通过示踪基因绿色荧光蛋白表达的观察、RT-pCR和ELISA检测目的 基因的表达.结果 成功获得重组腺病毒质粒pAd-HBc.重组质粒pAd-HBc导入293细胞,经过包装和二次扩大培养获得了具有感染能力的重组腺病毒颗粒Ad-HBc,其病毒滴度达5×109 pfu/mL,并能在真核细胞中有效表达目的 基因.结论 成功构建表达HBcAg复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步开展HBV基因治疗研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江鹏飞		9	35	4.0	5.0