人HSP 40基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 巴茂文 戚辰 李琳 杨卉 范国华 陈生弟
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: HDJ-1 HDJ-2 pcDNA3.1(+)质粒 pEGFP-N1质粒 转染
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 54-58
• 页数: 5页
• 分类号: R745.5|Q782|Q786
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2006.01.016

摘要

目的 构建人热休克蛋白40(HSP40)的2种同源物HDJ-1和HDJ-2基因真核表达载体,观察其在人成神经细胞瘤细胞株(SK-N-SH)中的表达.方法 从流产胚胎脑组织中抽提总RNA,RT-PCR扩增HDJ-1和HDJ-2 cDNA,经限制性内切酶双酶切后,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)和pEGFP-N1质粒中.HDJ-1和HDJ-2基因测序结果与基因库登录序列比对,序列正确的重组质粒用脂质体转染SK-N-SH细胞, Western blot和荧光显微镜观察基因表达情况.结果 HDJ-1和HDJ-2基因测序结果与基因库登录序列比对显示完全一致.Western blot证实pcDNA3.1(+)/HDJ-1转染SK-N-SH细胞24 h后有HDJ-1的过表达,至少持续72 h;pEGFP-N1/HDJ-1和pEGFP-N1/HDJ-2转染的细胞有HDJ-1/GFP和HDJ-2/GFP融合蛋白的表达,至少持续72 h.荧光显微镜观察到pEGFP-N1/HDJ-1和pEGFP-N1/HDJ-2转染的细胞中有绿色荧光蛋白的表达.结论 本实验成功构建pcDNA3.1(+)/HDJ-1、pEGFP-N1/HDJ-1和pEGFP-N1/HDJ-2真核表达质粒,并在SK-N-SH细胞中表达.