华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响

• 作者: 余新炳 徐劲 胡旭初 郑南才 陈金中 黄善盛 黄宝明
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 胞浆苹果酸脱氢酶 点突变 圆二色性
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 575-579
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4088字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.06.023

摘要

目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系.方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222 nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性. 结果 H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63 .5 ℃和64℃,比Cs-cMDH的tm值分别下降了4 ℃和3.5 ℃.结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学基础医学院病原生物学教研室	201	1352	17.0	28.0
2	徐劲	中山大学基础医学院病原生物学教研室	104	568	13.0	17.0
3	胡旭初	中山大学基础医学院病原生物学教研室	108	574	13.0	17.0
4	黄宝明		18	103	6.0	9.0
5	郑南才		12	53	5.0	7.0
9	黄善盛		3	20	2.0	3.0
10	陈金中	复旦大学生命科学院遗传研究所基因工程国家重点实验室	20	29	3.0	4.0