EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ(Stx2)的克隆表达与活性研究

• 作者: 易勇 毛旭虎 邹全明 马颖
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 志贺样毒素Ⅱ(Stx2) 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 933-936
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.10.018

摘要

目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺样毒素Ⅱ(ShigaliketoxinⅡ,Stx2),并鉴定其生物学活性.方法 采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增志贺样毒素Ⅱ的编码基因stx2,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2,经测序鉴定后转化E.col iBL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE、Western blot分析目的蛋白的表达.以EHEC O157:H7野生菌株作对照,通过对HeLa细胞的细胞毒作用及对小鼠攻毒实验,鉴定重组蛋白的生物学活性.结果 扩增的stx2基因约1230bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,蛋白表达率约25%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约72×103;重组蛋白Stx2对HeLa细胞具有细胞毒作用,CD50为35 pg/ml;Stx2对小鼠致死剂量LD100为10μg.结论 成功克隆并表达了Stx2重组蛋白,为探讨O157:H7菌的感染机制及其防治研究奠定了一定的基础.