HCA518的蛋白表达、纯化和单克隆抗体的制备

• 作者: 孙秀媛 杨小昂 邵启祥 钱晓萍 陈慰峰
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蛋白表达和纯化 肿瘤相关抗原 HCA518 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 29-32
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3460字
• 语种: 中文

摘要

目的:对HCA518蛋白进行表达和纯化,并制备HCA518蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在原核系统表达HCA518蛋白,金属镍螯合的Ni-NAT亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA方法进行单克隆抗体细胞株的筛选;Western blot方法鉴定单克隆抗体的特异性;免疫荧光法对HCA518蛋白进行定位.结果:成功表达和纯化了HCA518重组蛋白,其纯度达98%.共筛选出2株分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了HCA518的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体的效价分别为1×10-4、5×10-4,属于IgG2b亚型和IgM,该抗体能与重组蛋白和肿瘤细胞核蛋白(P100)发生特异性反应,免疫荧光显示HCA518蛋白主要定位于细胞核中.结论:建立了稳定分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体特异性好,对进一步应用于检测肿瘤组织中HCA518蛋白和判断肿瘤细胞的恶性增生程度预测肿瘤预后具有重要的实用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈慰峰	北京大学医学部免疫学系	56	250	8.0	13.0
2	钱晓萍	北京大学医学部免疫学系	15	30	4.0	4.0
3	杨小昂	北京大学医学部免疫学系	7	21	2.0	4.0
4	孙秀媛	北京大学医学部免疫学系	1	2	1.0	1.0
5	邵启祥	北京大学医学部免疫学系	1	2	1.0	1.0