EHEC O157:H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化

• 作者: 张卫军 易勇 曾明 毛旭虎 程建平 邹全明 马颖
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 志贺样毒素B亚单位(Stx2B) 基因克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 155-158
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 字数: 3328字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2006.02.015

摘要

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7志贺样毒素B亚单位(Shiga liketoxin 2B,Stx2B),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增志贺样毒素B亚单位的编码基因stx2b,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,以Tricine-PAGE和Western blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2b基因约210 bp;原核表达质粒pET-22b(+)-stx2b经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli BL21(DE3)中得到高效可溶性表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约7×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达90.1%.结论EHEC O157:H7志贺样毒素B亚单位的高效表达与初步纯化,有利于进一步的生物学性质研究.