反义MBD1基因片段真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 左石 邹声泉 郭伟
• 来源期刊: 中华普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 克隆,分子 基因表达 质粒 RNA,反义 甲基磷酸胞苷酰鸟苷结合蛋白1
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 293-295
• 页数: 3页
• 分类号: R6
• 字数: 2298字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1007-631X.2006.04.021

摘要

目的构建反义MBD1基因片段真核表达载体,为研究MBD1基因功能提供工具.方法根据MBD1基因cDNA序列中编码序列,设计PCR引物,在引物5'端分别添加Xba Ⅰ和Kpn Ⅰ酶切位点,将PCR片段反向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点上,构建反义MBD1基因片段真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定.结果PCR鉴定得到322 bp特异性条带,双酶切得到327 bp目的基因片段和5.4kb载体片段,DNA测序说明插入片段序列是正确的.结论采用基因克隆技术,成功构建了反义MBD1基因片段真核表达载体,为研究MBD1基因在DNA甲基化和肿瘤发生中的功能提供了实验工具.