携带可调控人胰岛素基因的腺病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 姚礼庆 张轶群 徐美东 沈坤堂 秦新裕
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒载体 葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP) 人胰岛素基因
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 内分泌
• 页码范围: 246-248
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 3740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6358.2006.02.045

摘要

目的:构建携带葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)启动子控制下的人胰岛素基因的腺病毒载体.方法:将GIP-hIns基因自pCDNA3-GIP-hIns质粒中酶切下来,克隆至切除CMV启动子的pCA13-△CMV质粒中,形成转移质粒pCA13-GIP-hIns,然后与质粒pBHGE3共转染至293细胞株,在其中同源重组形成腺病毒颗粒.采用PCR方法对重组体进行鉴定,同时测定病毒滴度.体外转染STC-1细胞,并采用RT-PCR检测感染腺病毒的细胞内有无hIns mRNA的转录.结果:由pCA13-GIP-hIns和pBHGE3共转染至293细胞后,可得到阳性重组体Ad.GIP-hIns,经PCR检测表明已含有GIP-hIns基因.纯化所得腺病毒滴度约为1×1011pfu/ml.RT-PCR证实在感染重组体腺病毒Ad.GIP-hIns的细胞中有相应mRNA的转录.结论:成功构建了携带GIP启动子控制下的人胰岛素基因的腺病毒载体,为进一步胰岛素基因治疗糖尿病的实验研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦新裕	复旦大学附属中山医院普外科	210	2042	26.0	39.0
2	姚礼庆	复旦大学附属中山医院普外科	291	3014	28.0	43.0
3	徐美东	复旦大学附属中山医院普外科	122	1147	18.0	28.0
4	张轶群	复旦大学附属中山医院普外科	46	494	12.0	21.0
5	沈坤堂	复旦大学附属中山医院普外科	40	140	6.0	9.0