肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

• 作者: 张卫军 毛旭虎 邹全明 马颖
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157 H7 毒素A亚单位 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（15）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1582-1584
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 3052字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.15.012

摘要

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westen blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2a基因约950bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%.结论EHEC O157:H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157:H7菌的感染机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室	258	1589	19.0	26.0
2	张卫军	第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室	58	319	11.0	13.0
3	毛旭虎	第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室	87	417	12.0	16.0
4	马颖	第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室	10	62	4.0	7.0