轮状病毒外壳抗原蛋白VP4基因转化苎麻的研究

• 作者: 刘恩平 孔华 章霄云 贺立卡 郭安平 郭运玲
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 轮状病毒 VP4基因 苎麻
• 年，卷（期）: 2006,（24）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 6460-6462,6464
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3566字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2006.24.026

摘要

利用套叠PCR技术对轮状病毒外壳抗原蛋白VP4基因进行了定点突变,将改造后的基因插入pBI121构建植物表达载体.在设计PCR引物时,引入植物表达载体pBI121具有的克隆位点BamH Ⅰ和SacⅠ,利用BamH Ⅰ和Sac Ⅰ切除pBI121上的GUS基因并使载体质粒线性化,用同样的2种酶消化pTVP4克隆载体获得VP4基因片段,使之形成与线性化pBI121质粒相同的粘性末端.在T4DNA连接酶的作用下,将线性化pBI121质粒和酶切后的VP4基因片段连接成新的重组质粒pBI121/VP4,通过直接转化法转化到根癌农杆菌(Agrobacteriumefaciens)EHA105菌株中,获得农杆菌工程菌株.采用叶盘转化法转化苎麻(Boehmeria.nivea L. Guad)栽培品种圆叶青,以卡那霉素抗性作为转化植株的筛选标记获得抗性植株.经PCR、PCR Southernblot分析表明,初步获得了轮状病毒外壳蛋白VP4的转基因苎麻植株.