人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达

• 作者: 沈大斌 罗福康 郑红 顾涛 龚小云
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: MIP-3 alpha 融合表达 pET32a(+)质粒 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 335-338
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 5017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2006.04.019

摘要

目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表达,Westem Blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白.结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3alpha融合蛋白.结论在大肠杆菌中成功构建的MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚小云	第三军医大学西南医院综合实验研究中心	14	83	5.0	9.0
2	郑红	第三军医大学西南医院综合实验研究中心	36	309	9.0	16.0
3	顾涛	第三军医大学西南医院综合实验研究中心	3	3	1.0	1.0
4	罗福康	第三军医大学西南医院综合实验研究中心	14	74	4.0	8.0
5	沈大斌	第三军医大学西南医院综合实验研究中心	5	8	2.0	2.0