巨噬细胞移动抑制因子基因的克隆和原核表达

• 作者: 余细勇 单志新 杨敏 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹 郑猛
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞游走抑制因子 克隆,分子 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 815-816,819
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 2294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2005.04.044

摘要

目的:扩增、克隆人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组MIF蛋白.方法:根据人MIF基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术从人T淋巴细胞mRNA中扩增MIF基因.将MIF定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,并将构建正确的重组表达载体pGEX-4T-MIF转化工程菌BL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖(IPTG)诱导表达重组MIF蛋白.用GSTrap亲合柱纯化表达产物GST-MIF,行柱上凝血酶消化,洗脱获得MIF蛋白.用巨噬细胞移动抑制试验(MMI)鉴定MIF蛋白的生物活性.结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果表明,成功构建了重组质粒pGEX-4T-MIF,人MIF cDNA长348 bp,编码115个氨基酸.经IPTG诱导,高效表达出可溶的GST-MIF蛋白.SDS-PAGE和Western blotting分析显示,GST-MIF经凝血酶消化,获得13 kU的MIF蛋白.MIF蛋白对巨噬细胞移动的抑制率达30%,具有生物活性.结论:克隆、测定了人MIF基因,在大肠杆菌表达出具有生物活性的MIF蛋白.