番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化

• 作者: 尹胜 张文 张红星 朱本忠 李欣 杨祥龙 罗云波 谢远宏
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄 乙烯 LeERF2 原核蛋白表达 凝胶阻滞实验
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 资源环境与生物技术
• 页码范围: 546-550
• 页数: 5页
• 分类号: S6
• 字数: 3525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2007.05.021

摘要

从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因.测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%.将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pE-LeERF2,将其转化到大肠杆菌BL21中.蛋白质诱导表达的温度为37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为3 h,LeERF2表达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白的58%.应用Ni-NTA亲和层纯化回收的LeERF2表达蛋白的纯度为99%.银染凝胶阻滞实验表明,LeERF2蛋白能与含有GCC盒的逆境相关的几丁质酶启动子基因TLBP1结合.