人sTNFR1基因的克隆以及在NIH3T3细胞中的稳定表达

• 作者: 傅蕾 刘洪波 彭仕芳 谭德明
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 人可溶性肿瘤病坏死因子受体1 克隆 真核表达 稳定转染
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 78-83
• 页数: 6页
• 分类号: R575.3
• 字数: 4362字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2007.01.015

摘要

以Hela细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,将重组质粒和脂质体共同转染NIH3T3细胞系,G418筛选稳定转染细胞株.经核苷酸序列测序和酶切鉴定,成功构建了pcDNA3.1(-)-sTNFR1真核表达质粒,脂质体法建立了高效表达sTNFR1的稳定转染细胞系,并经RT-PCR和Western B1otting鉴定.人sTNFR1基因能在NIH3T3细胞系中稳定表达,为今后的研究打下了基础.