王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

• 作者: 刘志刚 姚敏 孟光 张红云 邬玉兰
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 王棕花粉 肌动蛋白抑制蛋白 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 1054-1058
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-5101.2007.11.025

摘要

目的 克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin).方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因,由675个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸.经分析,这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白,等电点为4.86,相对分子质量(Mr)约为14.2×103.此序列已被GenBank收录,登录号为EF173599.重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功克隆和表达了王棕花粉profilin,为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬玉兰	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	36	133	6.0	8.0
2	刘志刚	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
3	姚敏		31	131	7.0	9.0
4	孟光	海口市人民医院耳鼻喉科	15	49	4.0	6.0
5	张红云	深圳大学过敏反应与免疫学研究所	10	71	5.0	8.0