nm23-H1基因实时荧光定量PCR标准质粒的构建

• 作者: 刘格 刘秋英 张传海 张美英 王一飞 郭朝万 金琳
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: nm23-H1基因 实时荧光定量PCR 重组质粒 标准品
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 604-605,615
• 页数: 3页
• 分类号: R446.1
• 字数: 2440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8685.2007.04.013

摘要

目的:制备用于nm23-H1基因mRNA实时荧光定量PCR检测的质粒标准品.方法:通过PCR扩增出目的片断,纯化后T-A连接至pMD18-T载体,转化宿主菌E.coli DHSα,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.结果:nm23-H1基因目的片段成功重组至pMD18-T载体上,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的荧光定量PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.结论:成功构建了nm23-H1基因实时荧光定量PCR质粒标准品.