小鼠神经生长因子基因重组腺病毒的构建及其在基底膜上的表达

• 作者: 宋武战 张学渊 池君
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: β神经生长因子 腺病毒 基底膜 基因干预
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 207-211
• 页数: 5页
• 分类号: R339.16|R394.8
• 字数: 3386字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2007.02.022

摘要

目的 构建具有生物学活性的小鼠神经生长因子(nerve growth factor,βNGF)基因重组腺病毒表达载体,并研究其在耳蜗基底膜上的表达特性.方法 利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从小鼠颌下腺总mRNA中扩增βNGF全长cDNA片断,定向克隆于携带巨细胞启动子(CMV)和标记蛋白-绿色荧光蛋白(eGFP)的腺病毒穿梭质粒pAdtrack中;在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-eGFP-mβNGF;在HEK293细胞中包装成为有感染能力的,能表达βNGF和绿色荧光蛋白的重组腺病毒颗粒.用病毒感染原代培养的耳蜗基底膜,激光共聚焦显微镜下观察病毒感染效率,RT-PCR法检测βNGF基因在基底膜上的转录表达,蛋白质免疫印迹法检测βNGF在基底膜上的蛋白表达.结果 成功获得小鼠βNGF的cDNA片断,经酶切鉴定证实重组腺病毒表达载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-eGFP-mβNGF构建成功.激光共聚焦显微镜下观测到感染病毒的基底膜发出明亮的绿色荧光,分别在mRNA和蛋白质水平证实有外源性βNGF的表达.结论 重组腺病毒表达载体能高效地将外源性目的基因βNGF导人体外培养的基底膜细胞中,并在基底膜中转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的βNGF对内耳各类细胞的保护作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学渊	第三军医大学西南医院耳鼻咽喉科	114	486	11.0	18.0
2	宋武战	成都军区昆明总医院耳鼻咽喉科	32	122	7.0	10.0
3	池君	第三军医大学西南医院耳鼻咽喉科	4	12	2.0	3.0