重组人神经生长因子β腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 冯波 支旭勃 李青旺 肖波 韩增胜
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人神经生长因子β 基因克隆 腺病毒
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 457-459,511
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 4750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.02.031

摘要

[目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF-β),并构建hNGF-β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础.[方法]用Trizol试剂提取人胎肝总RNA,应用RT-PCR方法以自行设计的带有His标签的引物来扩增NCF-β基因;将所扩增的NGF-β基因经酶切、纯化,与IRES-EGFP片段共同插入到Pshuttle-cmv载体中,测序后,利用基因同源重组技术构建hNGF基因的复制缺陷型腺病毒载体AdNGF-β,经鉴定,转染HEK293细胞,观察EGFP表达并检测重组腺病毒的病毒滴度.[结果]克隆的hNGF基因序列与GenBank中的hNGF基因序列完全一致并在3'端携带上His标签;重组腺病毒载体AdNGF-β经Pac Ⅰ酶切得到大于23.0和4.5或2.9 kb大小的2个片段,表明同源重组成功.2种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞后,均可观察到绿色荧光蛋白.收获病毒并测定感染滴度分别为1.00×109和0.99×109pfu/ml.[结论]克隆了带有His标签的hNGF-β基因,并成功构建了重组腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李青旺	西北农林科技大学动物科技学院	40	641	14.0	24.0
5	肖波	西北农林科技大学动物科技学院	16	61	4.0	7.0
7	支旭勃	西北农林科技大学动物科技学院	3	24	2.0	3.0
8	韩增胜	燕山大学环化学院生物工程系	15	102	4.0	10.0
9	冯波	西北农林科技大学动物科技学院	3	25	2.0	3.0