重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 何佑成 柏宏亮 王瑞 白转丽
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人神经生长因子(hNGF) 基因表达 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1013-1017,1117
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2014.11.003

摘要

目的 构建表达人神经生长因子β基因片段的重组腺病毒AdCMV-hNGF-β. 方法 以健康人白细胞中DNA为模板,扩增hNGF-β基因片段,导入pGEM-T-Easy质粒,获得重组质粒pGEM-T/hNGF-β.经酶切鉴定后与复制缺陷型腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA构建重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-hNGF-β.酶切鉴定后再与辅助包装质粒PJM17共转染293细胞,经同源重组后,构建复制缺陷型重组腺病毒AdCMV-hNGF-β.对AdCMV-hNGF-β进行基因鉴定,并测定滴度及在HeLa细胞中的表达. 结果 顺利克隆出hNGF-β基因片段,构建的重组质粒pGEM-T/hNGF-β和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-hNGF-β,经酶切鉴定实际结果与理论推导符合.构建的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV-hNGF-β滴度为1.2×1012pfu/ml,并能在HeLa细胞中表达. 结论 以hNGF-β基因片段为基础成功构建了重组腺病毒AdCMV-hNGF-β,测试表明该重组病毒具有高滴度活性和良好的感染人类细胞、表达目的蛋白的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王瑞	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	74	501	12.0	19.0
2	柏宏亮	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	20	98	5.0	9.0
3	白转丽	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	25	83	5.0	7.0
4	何佑成	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	7	18	3.0	4.0