猪白细胞介素-18基因克隆、序列分析及其真核表达载体的构建

• 作者: 崔保安 方忠意 李小康 贾云飞 赵丽 郑兰兰 陈瑞亮 陈红英
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 猪IL-18基因 克隆 表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 41-46
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 4061字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2007.01.008

摘要

采集6月龄河南良杂猪脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18全基因序列.序列测定表明,plL-18全基因核苷酸长度为579bp,编码192个氨基酸.与GenBank上已发表序列ABO10003进行比较,核苷酸同源性为99.8%,在第550位处(以ATG为1计)存在A→G的有意义突变.与从GenBank下载读取的ABO10003、AF176949、AY262109、NM1997序列进行比较分析,氨基酸同源性分别为99%、98.5%和99.8%、99%.将该基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA-IL18m,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为核酸疫苗的研究应用奠定了基础.