HIF干扰表达载体psilencer3.0-HIF-α siRNA的构建和鉴定

• 作者: 丁强 于江 张元芳 徐可 陆勇 高鹏
• 来源期刊: 中国癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧诱导因子-1 低氧诱导因子-2 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 946-950
• 页数: 5页
• 分类号: R737.11
• 字数: 3750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3639.2007.12.009

摘要

背景与目的:肾透明细胞癌是最常见的肾实质恶性肿瘤,生物学行为极为复杂,对放疗和化疗均不敏感.研究发现缺氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α与肾透明细胞癌发生发展过程存在相关性.本研究拟通过RNA干扰的方法构建psilencer3.0-HIF-αsiRNA重组质粒,从而为进一步探讨HIF在肾细胞癌发生发展中的功能提供有效的工具.方法:设计并化学合成编码HIF-1α和HIF-2αsiRNA的DNA片段,通过基因重组的方法将其构建进siRNA的表达载体.采用实时定量PCR和Western blot检测构建成功的siRNA表达载体在mRNA及蛋白水平对目标基因表达的抑制.结果:786-0细胞转染psilencer3.0-HIF-1αsiRNA和psilencer3.0-HIF-2α后,HIF-1α和HIF-2α的mRNA表达的抑制率分别达到了82.1%和87.4%;OS-RC-2细胞转染psilencer3.0-HIF-1αsiRNA和psilencer3.0-HIF-2α后,抑制率分别达到了91.2%和81.2%.在786-0细胞和OS-RC-2细胞中转染HIF-1α干扰质粒和HIF-2α干扰质粒的实验组蛋白表达量较空白对照均有不同程度的减低.结论:构建成功的siRNA表达载体可以有效抑制目标基因HIF-1和HIF-2在mRNA及蛋白水平的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张元芳	复旦大学附属华山医院泌尿外科	112	761	13.0	22.0
2	于江	复旦大学附属华山医院泌尿外科	14	81	5.0	8.0
3	徐可	复旦大学附属华山医院泌尿外科	51	233	8.0	12.0
4	丁强	复旦大学附属华山医院泌尿外科	192	1095	15.0	24.0
5	高鹏	复旦大学附属华山医院泌尿外科	17	59	5.0	7.0
6	陆勇	复旦大学附属华山医院泌尿外科	7	47	4.0	6.0