蛇毒类凝血酶安克洛在毕赤酵母中的表达

• 作者: 于学玲 周长林 方宏清 李招发 陈惠鹏
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛇毒类凝血酶 重组安克洛 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 412-415
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.03.015

摘要

目的:利用毕赤酵母表达具有生物学活性的蛇毒类凝血酶安克洛.方法:根据已知的天然安克洛的氨基酸序列,结合酵母偏好密码子,设计并合成了安克洛基因序列,将其克隆至表达载体pPIC9中,得到表达质粒pPIC9/Ancrod,电转至毕赤酵母GS115(His-)菌株感受态中,通过表达筛选获得工程菌株.采用5 L发酵罐对工程菌进行发酵,表达安克洛.在诱导表达阶段,补加甲醇-山梨醇混合碳源.经疏水柱、肝素亲和柱和阳离子柱三步分离纯化得到重组安克洛,并鉴定其体外生物学活性.结果:重组安克洛表观相对分子质量为43 000～48 000,其糖基化不均匀,去糖基后蛋白肽链的相对分子质量约29 000.重组安克洛被证明具有降解并凝固牛纤维蛋白原的活性,其比活力与天然安克洛相近.结论:采用毕赤酵母表达系统表达并获得有生物学活性的重组安克洛,为大规模生产打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方宏清	军事医学科学院生物工程研究所	42	245	8.0	13.0
2	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
3	周长林	中国药科大学生命科学与技术学院	80	451	12.0	18.0
4	于学玲	中国药科大学生命科学与技术学院	2	0	0.0	0.0
5	李招发	军事医学科学院生物工程研究所	2	16	1.0	2.0