乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 张雪寒 郭容利
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型脑炎病毒 Bac-to-Bac表达 ELISA方法
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 873-877
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 字数: 4179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.09.007

摘要

目的 克隆表达日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的E基因,研究其抗原性,并初步作为诊断抗原建立JEV抗体检测方法.方法用RT-PCR方法扩增E基因全长,然后克隆到pFastbacTM载体中,转化宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒转导到DH10Bac,利用通用引物鉴定阳性,提取其基因组转染昆虫细胞sf9,而后经IFA和Western blot进行鉴定.挑蚀斑纯化获得高纯度和高滴度的重组病毒,收集细胞裂解上清作为抗原建立间接ELISA方法,对不同年龄段猪血清进行检测.结果从JEV中成功克隆E基因,并在昆虫细胞中得到表达,分子量约53kD,具有良好的抗原性.建立的ELISA方法的抗原最佳包被浓度为30μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1 ∶40,阳性判定标准初步定为OD450≥0.3,且OD值待检血清/ OD值阴性血清≥2.结论 JEV的E基因经过体外昆虫细胞表达,获得抗原性良好的蛋白作为诊断抗原,用其建立的ELISA方法能很好用于猪群JEV抗体水平的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何孔旺	江苏省农业科学院兽医研究所	101	1368	22.0	33.0
2	倪艳秀	江苏省农业科学院兽医研究所	30	581	12.0	24.0
3	郭容利	江苏省农业科学院兽医研究所	6	40	4.0	6.0
4	俞正玉	江苏省农业科学院兽医研究所	16	93	6.0	8.0
5	张雪寒	江苏省农业科学院兽医研究所	21	120	7.0	10.0