人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化

• 作者: 刘兴汉 刘岩 刘远莉 张宇雯 李丹 李冀宏 栗亚 马洪星
• 来源期刊: 国际遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤抑素 RGD序列 基因重组 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 169-172
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3125字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2007.03.003

摘要

目的 构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化.方法 人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导其融合表达,对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析,DTT诱导柱上裂解以获得T21RGD肽.经Trcine-SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定.结果 质粒酶切和测序结果显示,含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50%以上,Trcine-SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符,反相高效液相色谱测定峰纯度达97%.结论 成功构建T21RGD肽融合表达载体,实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化,为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础.