Mer免疫球蛋白样区原核蛋白表达和单克隆抗体制备

• 作者: 周梦云 沈飞 范磊 谢丽倩 阮长耿
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Mer IgG样区 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R392.2
• 字数: 3185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0399.2007.01.002

摘要

目的 利用原核蛋白表达载体,体外表达Mer的IgG样区,并利用此重组蛋白制备抗Mer的单克隆抗体.方法 从K562细胞中抽提总RNA,利用RT-PCR扩增Mer的IgG样区片断.经过测序将所得片断与PQE30原核表达载体连接并转化到大肠杆菌M15中,挑选阳性克隆,经诱导和纯化后获得原核蛋白.利用所得的重组蛋白免疫Balb/e小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对Mer的IgG样区的特异性抗体.利用ELISA方法筛选阳性克隆,Westernblot方法进行验证.结果 体外成功表达MerIgG样区的原核蛋白,片断大小经修饰后约为26 kd,表达量占菌体总蛋白的15%,经Ni-NTA agrose柱纯化后得到纯化蛋白并免疫Balb/c小鼠.将小鼠脾脏细胞和杂交瘤细胞融合后得到1株特异性抗MerIgG样区的单克隆抗体--SZ-128,Westernblot显示此单抗可以和表达的重组蛋白和Mer胞外区真核蛋白反应.结论 成功制备1株抗MerIgG样区的特异性单克隆抗体,为研究Mer的功能提供了有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周梦云	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	7	11	3.0	3.0
2	范磊	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	8	45	3.0	6.0
3	沈飞	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	22	56	3.0	6.0
4	阮长耿	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	188	746	13.0	17.0
5	谢丽倩	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所	3	9	2.0	3.0