T7 RNA聚合酶的克隆及其介导基因转录功能的鉴定

• 作者: 何金生 杨兵 虞结梅 谢灿 陆燕燕
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细菌噬菌体T7/遗传学 转录,遗传
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 272-275
• 页数: 4页
• 分类号: R345.57|R378|R394-33|R394.2|R977.3
• 字数: 2734字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2007.03.012

摘要

目的 构建含T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase,T7 RNP)的真核表达载体,同时构建含T7启动子、增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP)和T7 RNP转录终止信号的载体,并通过观察EGFP的表达推测T7 RNP表达和T7表达系统介导基因转录的功能.方法 根据编码T7 RNP的基因序列,应用PCR技术从含有T7 RNP基因的E.coli BL21(DE3)基因组中扩增编码T7 RNP的基因片段,克隆至载体pcDNA 3.1(+).同时从px8δt载体和pGEM-T easy/EGFP上切下T7 RNP识别的终止信号(terminator,TER)和编码EGFP的基因,克隆至载体pcDNAII.将获得的两个重组质粒共转染BHK细胞.48 h后,通过观察EGFP基因在真核细胞内的表达情况,推测T7 RNP基因的表达及表达后识别T7启动子介导基因转录功能.结果 成功构建了含T7 RNP编码基因的真核表达载体pcDNA 3.1(+)/T7 RNP和原核表达载体pcDNAII/EGFP/TER,共转染BHK细胞后,可观察到EGFP表达的绿色荧光.结论 T7 RNP能顺利在真核细胞内表达,并通过与T7启动子和TER的相互作用,成功实现了EGFP基因的转录和表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何金生	安徽医科大学免疫学教研室	26	110	6.0	9.0
2	谢灿	安徽医科大学免疫学教研室	3	22	3.0	3.0
3	杨兵	安徽医科大学免疫学教研室	9	51	4.0	7.0
4	陆燕燕	安徽医科大学免疫学教研室	3	17	2.0	3.0
5	虞结梅	安徽医科大学免疫学教研室	4	27	3.0	4.0