U251细胞血清饥饿特异抗原的ScFv噬菌体抗体库构建

• 作者: 余敏 孙桂林 尚海 谭德勇
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: U251细胞 血清饥饿 ScFv 噬菌体展示 抗体库
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 727-731
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4729字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建一个U251细胞血清饥饿特异抗原ScFv噬菌体抗体库.方法:将U251细胞进行48小时的血清饥饿培养,将其细胞裂解液免疫4周龄的BALB/c小鼠,提取被免疫小鼠脾脏细胞总RNA,反转录成cDNA,利用RT-PCR扩增免疫球蛋白IgG的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用一个柔性片段(Linker)连接VL和VH基因片段,将连接产物重组到pCANTAB-5E载体,转入TG1菌株中,随后加入辅助噬菌体(Help phage)M13K07超感染,构建单链抗体片段(Single chain fragment of variation, ScFv)噬菌体抗体库.结果:经过富集筛选后,库容量达到3×106 cfu/L,随机挑取8个克隆进行ELISA检测,获得了1个阳性克隆.结论:成功构建了一个具有一定库容的U251细胞血清饥饿特异抗原的单链抗噬菌体抗体库,为筛选血清应答蛋白抗体、进一步克隆血清应答蛋白的基因奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭德勇	云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室	54	311	10.0	15.0
2	余敏	云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室	32	106	6.0	9.0
3	孙桂林	云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室	3	1	1.0	1.0
4	尚海	云南大学生命科学学院生物化学与分子生物学实验室	1	0	0.0	0.0