抗堆型艾美耳球虫子孢子单链抗体的构建及表达

• 作者: 何宏轩 刘丽艳 初冬 吴艳云 王三虎 王承民 秦建华 谢红兵 魏刚才 齐永华
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 堆型艾美耳球虫 子孢子 单链抗体 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医学
• 页码范围: 207-211
• 页数: 5页
• 分类号: S852.7
• 字数: 3818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2340.2007.02.019

摘要

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子抗原的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,通过在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至表达载体pET 28a(+)载体中进行表达,用Ni-NTA的金属亲和层析法进行纯化,通过SDS-PAGE和ELISA测定其纯度和生物学活性.电泳结果分析表明重组蛋白的相对分子量为32 kDa,纯度为94%;ELISA反应结果证明该单链抗体保持了单克隆抗体的生物学特性,并能与堆型艾美耳球虫子孢子抗原发生特异性反应.