小鼠4-1BB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外瞬时干扰效应的研究

• 作者: 傅晓岚 吴玉章 杨曌 牛微 王莉 赵建平
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠4-1BB RNA干扰 COS-7
• 年，卷（期）: 2007,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 601-603
• 页数: 3页
• 分类号: Q782|R392.1
• 字数: 2421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2007.07.012

摘要

目的 采用小片段RNA干扰(small interference RNA,siRNA)技术,通过构建系列小鼠4-1BB(m4-1BB)基因的特异性siRNA表达载体,体外观察对m4-1BB基因的瞬时沉默作用,筛选具有最佳干扰效果的siRNA表达载体.方法 设计并合成4条针对小鼠4-1BB全长特异性的siRNA寡核苷酸序列,插入真核表达载体(pENTRTM/U6 ),构建m4-1BB序列特异性siRNA 表达载体,根据靶位点分别命名为p336、394、498及763 siRNA,无关干扰质粒为pLacZ siRNA;通过体外m4-1BB真核表达质粒p4-1BB分别与各siRNA表达载体同时转染COS-7细胞,48h后通过RT-PCR和FACS(fluorescence-activated cell sorter,荧光活化细胞分选仪)观测COS-7细胞4-1BB mRNA及蛋白表达水平.结果经测序分析,各m4-1BB siRNA表达载体构建成功;其中p498 siRNA与p4-1BB双质粒转染COS-7 细胞,48h后可观察到细胞表面4-1BB分子明显下调,其胞内mRNA水平也显著降低,与无关干扰组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).其余siRNA载体,几乎无干扰效应,与无关干扰组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论我们所构建的p498 siRNA 真核表达载体,能明显干扰m4-1BB蛋白的瞬时表达,可望用于m4-1BB Lentivirus干扰表达系统的构建,进一步在小鼠原代T淋巴细胞内实现高效4-1BB表达沉默,以深入研究4-1BB对T淋巴细胞的生物学影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴玉章	第三军医大学全军免疫学研究所	325	1583	17.0	22.0
2	杨曌	第三军医大学全军免疫学研究所	22	78	6.0	7.0
3	牛微	第三军医大学全军免疫学研究所	12	41	3.0	6.0
4	赵建平	第三军医大学全军免疫学研究所	17	86	6.0	9.0
5	王莉	第三军医大学全军免疫学研究所	195	964	14.0	21.0
6	傅晓岚	第三军医大学全军免疫学研究所	35	138	7.0	10.0