人sTNFR1真核表达载体构建及体外抑制TNF-α细胞毒效应

• 作者: 傅蕾 彭仕芳 谭德明
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 人可溶性肿瘤坏死因子受体1 真核表达 瞬时转染 细胞毒性作用
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1324-1328
• 页数: 5页
• 分类号: R349.64
• 字数: 3197字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2007.12.005

摘要

目的 构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,研究sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.方法 以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1(-).sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,半定量PT-PCR法检测sTNFR1 mRNA的表达,MTT法检测sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.结果 人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-);通过与3-磷酸甘油醛(GAPDH)比较,pcDNA3.1(-)-sTNFR1转染的QSG7701细胞中sTNFR1 mRNA表达量明显高于空载体对照组和空细胞对照组(P＜0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,TNF-α对其细胞毒性作用受到抑制,当TNF-α浓度为100μg/L时pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞毒性较QSG7701下降64.8%.结论 成功地构建真核表达质pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α对瞬时转染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞株细胞毒性作用受到抑制.