弹性蛋白酶特异性抑制因子elafin基因重组腺病毒载体的构建、鉴定与表达

• 作者: 周向东 杜先智
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: elafin基因 腺病毒 慢性阻塞性肺疾病
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 495-499
• 页数: 5页
• 分类号: R562
• 字数: 5038字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建elafin基因高效表达重组腺病毒载体Ad-elafin.方法:抽提人肺总RNA进行逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)扩增elafin基因,PCR产物双酶切后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上;在BJ5183细菌内与pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定;Pac Ⅰ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,获得腺病毒载体Ad-elafin;继之在293细胞内扩增,利用报告基因GFP监测病毒滴度和感染效率,Western blot检测elafin蛋白的表达,ELISA鉴定elafin蛋白对弹性蛋白酶活性拮抗作用.结果:酶切、PCR、蛋白表达测定及拮抗弹性蛋白酶活性初步鉴定证实弹性蛋白酶特异性抑制因子elafin基因重组腺病毒载体Ad-elafin构建成功.结论:成功构建了重组腺病毒载体Ad-elafin,为进一步深入研究慢性阻塞性肺疾病的发病机制奠定了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周向东	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	235	1426	17.0	27.0
2	杜先智	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	69	272	8.0	12.0