可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体

• 作者: 余少文 刘刚 张超 邢苗
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤维二糖水解酶 巴氏毕赤酵母 分泌型表达载体 里氏木霉 T-载体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 52-58
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2007.01.010

摘要

从毕赤酵母表达载体pPICZαA出发,构建了可直接克隆PCR产物的毕赤酵母分泌型表达载体(毕赤酵母表达型T载体),并通过表达重组纤维二糖水解酶Ⅱ对该载体进行了检验.设计合适的引物扩增一DNA片段,使该片段的上游含XhoⅠ和Eam1105Ⅰ酶切位点,下游含Eam1105Ⅰ和XbaⅠ酶切位点.通过XhoⅠ和XbaⅠ位点将扩增产物与质粒pPICZαA连接形成重组质粒.用Eam1105Ⅰ酶切重组质粒,回收大片段即得到毕赤酵母表达型T载体pPICZαT.使用该表达型T载体进行了里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因(cbh2)的克隆和在巴氏毕赤酵母中的表达.结果表明,使用表达型T载体可以直接克隆PCR产物,而且可以使外源基因在毕赤酵母中成功表达.另一方面,使用该载体时不需要使用限制性内切酶,从而可以避免在所表达蛋白的N-末端引入多余氨基酸.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余少文	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	41	398	10.0	18.0
2	刘刚	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	36	341	10.0	17.0
3	邢苗	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	51	507	13.0	20.0
4	张超	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	22	14	2.0	3.0