人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

• 作者: 何宏轩 张静 柏佳宁 段明星 胡慧中
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 热休克蛋白 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 22-24,28
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 2357字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.01.006

摘要

目的 克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体.方法 将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109.挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白.结果 在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22.3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%.Western blot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性.通过Ni2+-NTA亲和柱,从1 L诱导产物中纯化出约15～20 mg重组蛋白,纯度在80%以上.结论 已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段明星	清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室	21	261	8.0	16.0
2	何宏轩	中国科学院动物研究所国家野生动物疫病研究中心	59	311	9.0	15.0
3	柏佳宁	河北师范大学生命科学院	9	39	4.0	5.0
4	张静	清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室	25	133	6.0	11.0
5	胡慧中	清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室	1	1	1.0	1.0